Efeito da idade da folha na qualidade do DNA extraído de Piper aduncum L.

Resumo

Piper aducum é espécie nativa da Amazônia, com potencial para exploração econômica, devido a suas propriedades medicinais e produção de óleo essencial que tem sido utilizado como fungicida, bactericida e larvicida. Estudo diversidade genética com P. aduncum podem auxiliar no desenvolvimento estratégias de conservação e na obtenção de cultivares melhoradas para a introdução da espécie em sistemas agrícolas. Os estudos de diversidade genética podem ser conduzidos usando marcadores moleculares e muitos desses pesquisas requerem DNA de alta qualidade. O objetivo do presente foi ajustar um protocolo de extração de DNA para esta espécie, bem como, avaliar o efeito da idade da folha na qualidade da extração, visando gerar informações que contribuam para realização de posteriores estudos genéticos com técnicas moleculares. Para extração de DNA foram coletadas folhas jovens, adultas e senescentes de P. aduncum. A extração foi realizada com base no método CTAB, sendo testadas duas concentrações de CTAB (2% e 5%) e o tempo de incubação em freezer com isopropanol. A qualidade e concentração de ácidos nucleicos foram analisadas por espectrofotômetro, e a integridade do DNA extraído foi avaliada em gel de agarose 1%. A espectrometria revelou que a partir folhas jovens foi possível obter maior quantidade de DNA, utilizando CTAB 5%. Folhas jovens e adultas produziram um DNA puro com alta qualidade, porém nas amostras provenientes de folha senescente foi observada a presença de contaminantes como proteínas e polifenois. O tempo de incubação das amostras em freezer com isopropanol não interferiu na qualidade do DNA. Apenas amostras de DNA de folhas jovens e adultas foram passiveis de amplificação por meio dos marcadores ISSR. Para extração de DNA de Piper aduncum recomenda-se o uso do protocolo de CTAB 5%, sem precipitação no freezer com isoproponal e o uso de folhas adultas.